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    KR0501-50 | All-in-One First-Strand Synthesis MasterMix (with dsDNase)(第一鏈式反轉錄)

    貨號: KR0501-50


    名稱: All-in-One First-Strand Synthesis MasterMix (with dsDNase)(第一鏈式反轉錄)


    規格:  50T | 100T

    ¥1000

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    • 地      址:北京市北京經濟技術開發區科創六街88號院6號樓3單元116室

    詳情

    儲存條件

    儲存于-20℃,有效期一年。



    產品介紹

    KEIris RT mix with DNase(All-in-One)是將 RNA 合成

    cDNA 的一個操作更為簡便的系統,含有第一鏈 cDNA 合成所需的全部試劑,僅需加入 RNA 模板和水即可進行逆轉錄反應,操作非常方便。使用該逆轉錄預混液 15 分鐘內最長可獲得12 kb 大小的cDNA。合成的cDNA 推薦用于qPCR 反應。

    該預混液采用特制的高效 DNase,該酶具有熱敏感性, 可在高溫條件下快速不可逆地失活,因此僅需一次加樣,即可同管進行去除基因組 DNA 污染與逆轉錄反應,與使用DNase I 去除基因組 DNA 污染相比,無需額外加入 EDTA 進行失活,不僅減少了對 RNA 模板的損傷、降低 RNase 污染風險,而且節省實驗時間。

    1. 在冰浴的無核酸酶的離心管中配制下列逆轉錄體系:


    組分

    體積

    KEIris 5× RT All-in-One Mix

    4 μL

    dsDNase

    1 μL

    模板 RNA

    50 ng - 1 μg

    RNase-free water

    加至 20 μL

    注:推薦使用試劑盒提取的高質量 RNA 作為模板。

    2. 輕輕混勻,瞬時離心(使液體沉于底部);

    3.  在PCR 儀上進行下列條件的反應: 37℃溫育 2 min,以去除基因組 DNA 污染; 55℃,溫育 15 min;

    85℃,孵育 5 min,以終止反應

    4. 將獲得的產物迅速置于冰上或立即保存于-20℃,用于后續實驗。


    注意事項

    1. RNA 模板的純度和完整性是影響逆轉錄效果的重要因素, 如模板中含有蛋白、EDTA、酚等雜質會使 RNA 降解。

    2. 若后續實驗為 qPCR,逆轉錄產物的加量應不超過 PCR 體系終體積的 1/10,如 20 μL PCR 反應體系,逆轉錄產物的加量應不超過 2 μL。

    3. 預混液中已經包含 Oligo(dT)20VN 和隨機引物,不僅適用于包含 Poly(A) 結構的真核生物 mRNA,也適用于不含

    Poly(A)結構的原核生物 RNA、真核生物 rRNA tRNA 等模板,但不適用于 miRNA 等小 RNA 模板。

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